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用來(lái)進(jìn)行蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的測(cè)定的儀器,稱為氨基酸分析儀。必須先蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸,然后再進(jìn)行氨基酸分析。其是以陽(yáng)離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定為基準(zhǔn)的離子交換色譜儀。
基本原理
氨基酸混合物在流動(dòng)相(緩沖溶液)的推動(dòng)下從裝有陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的色譜柱流經(jīng)流經(jīng),各氨基酸與樹(shù)脂中的交換基團(tuán)交換離子。當(dāng)洗脫時(shí)使用的pH緩沖溶液不同時(shí),氨基酸混合物由于不同的交換能力而分離,分離出的單個(gè)氨基酸組分與茚三酮試劑發(fā)生反應(yīng),生成紫色化合物或黃色化合物,其在570nm、440rnn的吸光度用可見(jiàn)光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。
這些有色產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度與洗脫出來(lái)的各氨基酸濃度之間的關(guān)系和朗伯-比爾定律相符合。以此為依據(jù)可以定性、定量分析氨基酸各組分氨基酸分析儀也可利用陰離子交換分離后經(jīng)積分脈沖安培法檢測(cè)。此檢測(cè)方法不需要柱前或柱后衍生待測(cè)氨基酸。
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